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细胞增殖实验MTT

添加时间:2022-09-21

MTT法:又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。

检测原理:

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

用途:广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

特点:灵敏度高、经济。


CCK-8法:又称细胞增殖和细胞毒性实验。

检测原理:

该试剂中含有WST-8,在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazan dye)。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

用途:广泛用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。

特点:对细胞毒性小,可以多次测定选取最佳测定时间;检测迅速;灵敏度高。


BrdU法:直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞增殖能力。

检测原理:

用BrdU预处理的细胞中,BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中,而且这种置换可以稳定存在,并带到子代细胞中。细胞经过固定和变性处理后,可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量(如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记,最后用比色法或荧光的方法进行定量测定),从而判断细胞的增殖能力。

用途:可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。

特点:简单、快速、安全,检测的敏感性好;适合于大块组织的快速检查,尤适于定量研究;BrdU既可用于活体标记,亦可用于细胞或组织细胞增殖、分化的标记。副作用低;此方法的缺点是标记时间较短。


EDU法:检测细胞增殖的方法。

检测原理:

EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

用途:在细胞水平上EdU对增殖细胞的标记,对植物增殖细胞进行标记并检测、细胞示踪实验等。

特点:EdU法检测细胞增殖,无需抗体,无变性步骤,保持细胞形态和DNA完整性。


✦细胞凋亡磷脂酰丝氨酸外翻分析:又叫做Annexin V法,常用来检测细胞凋亡。

检测原理:

磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

用途:用于区分早期凋亡的细胞与晚期凋亡加坏死的细胞。最适合悬浮培养的细胞。

特点:某些细胞的细胞膜外表面带有大量的PS,因而也不能使用该方法(比如巨核细胞、血小板、某些骨髓系细胞);灵敏度高、方便快捷;只适用于活细胞,不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。磷脂酰丝氨酸外翻分析


✦作为细胞生长的媒介之一,血清品质优劣,直接影响细胞的长势,从而影响实验结果的产出。

因此,挑选一款品质优异的血清尤为重要。Ausbian进口特级胎牛血清,采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血,出厂前均经过严格质控,并附详细《检测报告》,如pH值、渗透压、内毒素、病毒检测、促细胞生长能力、无菌等检查,均有详细说明。




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