1．石蜡包埋程序

1）组织取材3mm厚度，固定于福尔马林数小时后再换以新鲜福尔马林固定数小时。

2）组织流水冲洗6-12h。

3）70％酒精2-4h。

4）80％酒精2-4h。

5）90％酒精2-4h。

6）95％酒精（Ⅰ、Ⅱ）2-4h。

7）100％酒精（Ⅰ、Ⅱ ）1-2h。

8）二甲苯（Ⅰ）5-30min。

9）(二甲苯（Ⅱ） 5-30min)。

10）浸蜡（Ⅰ、Ⅱ ）2h。

11）组织包埋

2、石蜡切片与冰冻切片的优缺点？

石蜡切片优点1.标本大小灵活2.切片厚度均匀（1-200μm）3.可少量或批量制作4.切片保持时间长 缺点1.不能很好地保存细胞组织内酶或抗原的活性2.脂肪被溶解3.不能保障大且坚硬组织的切片质量

冰冻切片法优点• 切片制作时间短• 较好的保存脂肪和类脂、酶及抗原活性• 可应用于脂肪显示，酶的定位、定性甚至定量、组织荧光、免疫荧光和放射自显影等方面

缺点• 标本结构和形态的显示逊色于石蜡切片• 冷冻过程中易形成“冰晶”• 难以制作连续切片和薄的切片

3、染色的目的，普通染色、特殊染色、复染色定义。常用染色方法。

染色的目的：将标本切片浸于染色剂内，经一定的时间，使组织或细胞及其他的成分被染上不同的颜色，产生不同的折射率，便于在光镜下进行观察。

普通染色：最广泛应用的是苏木精和伊红染色，又称常规染色。 特殊染色：为显示特定的组织结构或其他的特殊成分。 复染色：衬托主染色所进行的染色。

常用的染色方法

一、苏木精：是现今最常用、最有价值的常规细胞核染色剂，习惯上称苏木精是碱性染料 。

二、伊红：是一种胞浆较理想的染色剂。常用伊红Y。酸性染料组织成分呈弥漫性染色。

4、石蜡切片常规染色步骤。

1） 脱蜡至水

①二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各5-10min②100%乙醇 （5～10）min×2或3次③依次95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各5～10min④蒸馏水浸洗 2～5min 2）苏木精染色：

① 苏木精1-10min。② 自来水流水冲洗。③ 0.5%盐酸-乙醇分色，数秒-数十秒。自来水快洗。

④ 0.5%氨水蓝化，30sec-1min，自来水冲洗⑤ 光镜下镜检细胞核分色程度。⑥ 自来水流水冲洗3min。

3）伊红染色

① 1%伊红1-10min。 ② 蒸馏水快洗。

5.脱水、透明和封固：

① 70%、80%、90%乙醇速洗，每级数秒-数十秒。

② 95%30sec-1min.光镜下监控细胞核与细胞质颜色对比。 

③ 100%乙醇，3-5min，2次。④ 二甲苯Ⅰ、Ⅱ,各5-10min。⑤ 封片:中性树胶。

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