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常用的细胞计数方法

添加时间:2022-11-11

一、原理:

细胞悬液制备后,需要计算悬液中所含细胞数量;一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力,接种后能够生长增殖,所以在接种关应先检查一下细胞的活力。

二、实验步骤:
1. 计数板
用96%酒精冲洗计数板后,用干净鹿皮擦净,另擦净盖片一张;把盖片覆在计数板上面,使之微微移向一侧,露出计数板台面少许,以便滴加细胞悬液;

2. 染色
取吸管1 支,伸入培养瓶中,轻轻反复吹打细胞悬液使细胞重悬均匀后,立即吸细胞悬液少许,向另一离心管中滴入细胞悬液9 滴,再滴入台盼蓝染液1 滴,混匀,置2~3 分钟;

3. 加悬液
把计数板平放在显微镜台上,立即从计数板边缘轻轻滴1~2 滴已染色的细胞悬液,使之充满计数板和盖片间空隙中;

4. 镜检

镜下观察可见细胞分散各处,健康细胞胞体完整,透明不着色,凡着色细胞均为不健康者。计算四角大方格内的细胞数;压中线者只计算左线和和上线者,右线和下线不计算在内(即仅计算压两个边的细胞)。

5. 接种培养
通过计数测知悬液中细胞数后,可根据实验所需细胞数量向培养容器中接种。细胞接种数量随实验目的、血清含量和细胞生物性状而定;一般接种量在1~10x105细胞/毫升范围,实验周期短,希望细胞增殖较快时,接种量可大些。用含血清量大的培养液培养胚胎来源细胞、无限细胞系和恶性细胞系时,细胞接种数量不宜太大。




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