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石蜡包埋切片制作方法
这是最常用的切片法。以石蜡作为组织的填充支持介质,将整块组织加以包埋,最后凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取极薄的切片。为了让石蜡能浸入组织内部,需将组织经过脱水等处理。过程大致如下:
(1)固定:生物标本脱离机体或培养环境,细胞会发生自溶,腐败分解。因此,需用固定剂处理,使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供永久保存的标本都需经固定处理。
常用的固定剂是甲醛、乙醇等,能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液,例如 Carnoy固定液,由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成,固定力更快更强,不含水分,可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。
(2)脱水:是将组织细胞所含水分除去。通常用乙醇(Alcohol,酒精),浓度递升到 100%。此过程还使组织块进一步硬化。
(3)透明:是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂,将组织中的酒精取代,以便石蜡浸入。通常用二甲苯(xvlene)为透明剂。
(4)浸蜡:在温箱内进行。已透明的组织块放入加热融解的石蜡中,让石蜡浸透组织,作为支持介质。
(5)包埋:将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中,迅速冷凝,组织决便被蜡包埋。
(6)切片:用切片机。常用的切片机有轮转式、平推式的。用轮转式的易干切出连续切片。切片厚度随制片目的而调整。教学标本厚度多是5~6um。
(7)贴片烤干:石蜡切片在温水上展平后,移在玻片上,烤干,即可供染色处理。染色后用树胶、盖坡片封固,可永久保存。
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