流式细胞术的基本操作与技巧：

以体外培养的PBMC细胞为例：
1、细胞培养在96孔板中，直接收集细胞于1.5ml的EP管中，350g，4°C离心5min，弃上清；
2、然后用1ml FACS buffer重悬沉淀，350g，4°C离心5min，弃上清；
3、封闭：标记样品细胞的荧光素偶联抗体多为单克隆抗体，少数也可能是多克隆抗体，其基本结构都由两部分组成，即包含有特异性结合抗原位点的Fab段和相对保守的Fc段，抗体的特异性表现在Fab段，标记时利用Fab段的抗原结合位点与细胞上抗原分子特异性结合，从而标记并且相对量化细胞表达该抗原分子的情况。但是，有些细胞表面表达FcR(Fc receptor, Fc受体），如巨噬细胞、DC、B淋巴细胞等， FcR可以与荧光素偶联抗体的Fc段进行非特异性的结合，对结果产生一定的影响。

封闭方法1：

取适量的血清全IgG抗体与样品细胞充分混匀，4'C静置 15min。研究人的细胞时，若荧光素偶联抗体来源于小鼠，封闭采用小鼠血清全IgG抗体。 原则是，如果流式抗体可能与样品细胞的FcR发生非特异性结合，那么在标记荧光素偶联抗体之前先用流式抗体同源的全IgG抗体进行封闭，使样品细胞表面的FcR饱和。

封闭方法2：

适量的抗CD16和抗CD32单克隆抗体与样品细胞充分混匀，4'C静置 15min。CD16是一种FcR, 能够与IgG的Fc段结合，亲和力较强； CD32也是一种 FcR, 能够与IgG的Fc段结合，亲和力中等。 而荧光素偶联抗体基本上是IgG抗体，所以在标记荧光素偶联抗体前可以用抗CD16和抗CD32单克隆抗体封闭样品细胞，使样品细胞表面的FcR都被抗CD16 或抗CD32单克隆抗体结合，从而阻止后续荧光素偶联抗体与FcR的非特异性结合。

具体沟通：400-9688-170

增值服务

组织/切片服务

各类病理染色服务

免疫组织化学(IHC)实验服务

western blot（wb）实验服务

动物各类疾病模型服务

动物活体成像实验服务

动物微型CT成像实验服务

动物核磁共振(MRI)成像实验服务

动物超声成像实验服务

分子及蛋白实验检测服务

透射电镜(TEM)实验服务

细胞培养实验服务

细胞造模实验服务

细胞毒性检测服务

慢病毒、腺病毒、载体构建

南京中科世康生物拥有专业的动物造模平台，实验人员拥有十年的实战经验，跟多个高校、医院老师合作，服务内容包含：透射电镜、动物造模、细胞实验，he染色、免疫组化，蛋白组学、代谢组学、Western  Blot  、PCR实验、膜片钳检测等等，期待您的咨询~  联系电话：400-9688-170