导致细胞转染效率低的原因及解决方法_南京中科世康生物科技有限公司

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导致细胞转染效率低的原因及解决方法

添加时间：2022-11-29

细胞转染实验是指将DNA、RNA等外源物质通过电转染或化学转染的方式导入至细胞内的实验方法。不同的细胞系转染难度也各部相同，尤其是对生长条件要求较为苛刻的细胞，比如原代细胞的转染效率会远低于其他细胞。这里，盘点了一下那些可能导致细胞转染效率低的原因、转染试剂选择指南，以便提升您的细胞转染效率。

一、实验条件和操作方法不合规
正常情况下，做细胞转染实验前需要充足的准备，比如：细胞、DNA、转染试剂、培养基等。除了合规的实验条件以外，还有较为重要的就是实验操作方法，实验是一个较为严谨的过程，所以每一步的操作步骤都要严格按照操作规程和说明书进行操作，才能避免人为原因所造成的失误。

二、细胞活性不足，细胞密度不足
细胞的生长状态对细胞的转染效率的影响较大，细胞长势弱或者细胞的铺板密度过低，可能会转染试剂的细胞毒性而导致转染效率过低，甚至转染失败。因此细胞转染时机应在细胞的对数生长期，细胞的铺板密度一般以90%-95左右为宜。

三、转染的DNA或RNA浓度过低、质量过低
如果转染质粒的DNA或RNA的纯度不够，其中的其它外源物质可能会干扰细胞造成轻微的细胞毒性，进而影响到细胞的转染效率。正常情况下，用于细胞转染的质粒浓度应大于500ng/ul。在做RNA转染实验时，可以尝试Lip RNAiMAX Transfection Reagent试剂，这类试剂的细胞毒性较低，转染效率较高，并且操作简单易于优化，比较适用于高通量转染。

四、细胞本身转染难度大
细胞转染效率低的原因还跟需要转染的细胞类型有关。细胞类型的不同，转染效率也会有较大差别。尤其是MSC细胞、PSC干细胞、神经干细胞、原代细胞等，对于一些较难转染的细胞，可以尝试高效率的转染试剂或者使用其他转染方法，灵活变化。比如：使用Lipofectamine Stem试剂。

五、转染试剂选择不当
转染试剂的选择时保证细胞转染效率的关键，低质量的转染试剂可能具有较强的细胞毒性，操作过程繁杂，出现转染效果不稳定等现象，遇到难转细胞系甚至出现转染失败。实验室里经常使用的LIP2000，LIP3000的转染试采用脂质体纳米颗粒技术，能够将转染的效率提升10倍作用，比较适合用于HEK293、原代细胞、干细胞等难以转染的细胞类型，并且还具有可重复性。