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实验原理:
尼氏染色法(Nissl Staining)是用碱性染料染神经组织的一种方法。尼氏体是胞质内的一种嗜碱性物质,广泛分布于各种神经元中,不同神经元中的尼氏体形状、大小和数量都各有差异。尼氏染色法可以染出尼氏体,用来观察神经元内的细胞结构,还可以通过对尼氏体的观察来了解神经元的损伤情况。用于尼氏染色的碱性染料主要有焦油紫、亚甲蓝、甲苯胺蓝和硫堇等。在此以甲苯胺蓝染料为例,对小鼠脑组织进行尼氏染色。
实验步骤:
1.石蜡或冰冻切片依次经二甲苯、无水乙醇、95%酒精、80%酒精、70%酒精和蒸馏水,各自时间可以参考HE染色
2.1%焦油紫或1%硫堇染色10min至1h
3.蒸馏水稍冲洗
4.70%酒精分色数秒至数分钟
5.依次经70%酒精、80%酒精、95%酒精,各2min脱水
6.无水乙醇2次,每次5min。二甲苯2次,每次10min
7.DPX封片。尼氏体呈紫色、细胞核呈淡紫色
实验注意事项:
1.切片若为石蜡切片,要在二甲苯中先脱蜡
2.焦油紫或硫堇的染色时间也是根据染液配制时间的新旧、切片厚度和环境温度灵活掌握,且染色后的标本需避光保存,否则容易褪色
3.尼氏体离体后容易溶解,所以组织取出后应立即固定,否则难以着色
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