准备好组织冰冻切片和相关的抗体试剂，即可开始下面的实验啦~~

封闭: 将组织切片自-20℃冰箱取出，室温静置15 min（可采用免疫荧光封闭用笔在组织周围画圈以避免抗体扩散），随后采用1×PBS洗三次，每次5 min，最后采用blocking buffer（绵羊血清5%，0.3%Triton-100，采用1×PBS稀释可得）室温封闭1 h。

一抗孵育：

滤纸吸掉玻片上的封闭液（吸取的时候要注意不要碰到组织样本），并滴加blocking buffer配置的待测抗体，将玻片置于湿盒中，4℃孵育过夜。既然是湿盒，应该都知道里面要加水防止抗体蒸发的吧，嗯嗯，聪明的你们肯定知道。

二抗孵育：

第二天把湿盒从冰箱拿出来(一般来说大部分的染色可直接做下面的步骤，如果待测蛋白比较难染色，可将湿盒置于室温继续孵育一段时间，时长自己定)，回收一抗(土豪的话就随意)，1×PBS滴加到玻片上，洗三次，每次3 min，随后吸取多余的1×PBS。

接下来所有的操作均在避光条件下进行，这很重要！

滴加二抗（同样用blocking buffer配置哦），室温孵育1 h。

 染核：

吸掉二抗，滴加DAPI孵育3-5 min，1×PBS同上方法洗三次。

最后用滤纸吸取多余的液体，用含有抗淬灭剂的封片剂封片，避光保存后即可在显微镜下观察染色的情况。

以上就是实验步骤。有做过病理实验的人都清楚，病理实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验的， 南京中科世康生物技术有限公司实验人员拥有十年的实战经验，跟多个高校、医院老师合作，除 免疫荧光、免疫组化，透射电镜、免疫电镜、HE染色，油红O染色、瑞氏染色、甲苯胺蓝染色、Masson染色、吉姆萨染色等等，期待您的咨询~   联系电话：4009688170