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免疫组化IHC的操作方法——南京中科世康生物

添加时间:2021-12-09

   免疫组化,抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。

    免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面:

    1、确定转移性恶性肿瘤的原发部位;

    2、对某类肿瘤进行进一步的病理分型;

    3、恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断;

    4、发现微小转移灶,有助于临床治疗方案的确定,包括手术范围的确定。

    5、为临床提供治疗方案的选择。

    6、软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的;

   下面介绍下,具体的操作方法:

免疫组化IHC的操作方法——南京中科世康生物(图1)

    一、材料

    片子、脱蜡装备、抗原修复液、3%H2O2,一抗,二抗+HRP,显色剂,乙醇,苏木素,显微镜、二甲苯、中性树胶、盖玻片;

    二、实验步骤

    1、烤片、脱蜡:65℃烤箱烘烤1h(冬季可多考30min),常规脱蜡、复水,放入水中浸泡5min。

    2、抗原修复。配置:3g柠檬酸三钠+RO水至900ml,调PH=6,加水至1000ml。微波炉加热,高火10min(用保鲜膜盖上,记得打孔出气),将片子放入沸腾的水中浸没,放至自然冷却。

    3、封闭、孵一抗。将冷却的片子取出,用油笔或石蜡化圈,不要碰到组织。分别滴加100ul左右3%H2O2封闭液(覆盖组织),放至10min,PBS洗3次*3min,滴加5%BSA孵育10min,倾去液体(不洗)滴加一抗,4℃放至过夜。

    4、孵二抗、显色、复染。将片子取出,PBS洗3次*3min,滴加二抗+HRP,37℃放置1h,取出片子,PBS洗3次*3min,滴加显色剂镜下显色(最好选取模型组摸出适当的显色时间,后面采用同样时间显色),待显色完成,PBS洗3次*3min,用苏木素进行复染20s,自来水洗3min。

    5、脱水、封片、拍照。100%乙醇脱水1min,晾干,二甲苯透明10min,晾干,中性树胶封片。完成过后,第二天即可进行拍照处理,可用ImageJ、ipp等软件分析。

    注意要点:

    制备好的4mm厚组织,贴于粘附玻片上;片子前期一定要做好,防止掉片;

    脱蜡,一定要脱干净,可影响后面片子的整个效果,一般冬天较难脱干净;

    显色不能过时,颜色会不好看,复染太久也会影响目标蛋白的结果。

    有做过病理实验的人都清楚,病理实验看似容易,但真想把它做好,还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验的,






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